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土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)活性檢測試劑盒說明書 微量法
貨號:4033
規格:100T/48S
產品內容:
試劑一:液體30mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2mL丙酮溶解,用不完的試劑仍-20℃保存; 試劑三:液體30mL×1 瓶,4℃保存;
標準品:液體1mL×1支,5 mmol/L的對硝基苯酚溶液,4℃保存。臨用前用試劑一將標準品稀釋50倍得100μmol/L 的標準溶液。
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)是土壤微生物分泌的溶酶體中的一種酸性水解酶。其活性變化與機體某些病理狀態密切相關。
S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算NAG活性。
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰、30-50目篩(或更?。┖驼麴s水。
一、樣本處理:
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干,過30-50目篩。二、測定步驟:
(1) 分光光度計/酶標儀預熱30min,波長調至400nm,蒸餾水調零。
(2) 加樣表:
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 |
風干土樣(g) | 0.03 | 0.03 | - | - |
試劑一(μL) | 165 | 165 | - | - |
試劑二(μL) | 15 | - | - | - |
混勻,37℃水浴1h 后,立即沸水浴5min(蓋緊, 防止水分散失),流水/冰浴冷卻。 | - | - | ||
試劑二(μL) | - | 15 | - | - |
12000g 25℃離心10min,取上清液 | - | - | ||
上清液(μL) | 100 | 100 | - | - |
標準品(μL) | - | - | 100 | - |
蒸餾水(μL) | - | - | 100 | |
試劑三(μL) | 200 | 200 | 200 | 200 |
室溫靜置2min 后,10000g 常溫離心5min,吸取200μL上清于微量玻璃比色皿或直接在96孔板中,測定400nm處的吸光值A。分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管。計算ΔA=A 測定管-A對照管,ΔA標準=A標準管-A 空白管。每個測定管設一個對照管。 |
單位的定義:每天每g土樣中產生1 μmol 對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
S-NAG活力(U/g 土樣)=ΔA÷ (ΔA標準÷C標準)×V 反總÷W÷T =0.432× ΔA÷ ΔA標準÷W。
T:反應時間,1h=1/24d;V 反總:反應體系總體積:1.8×10-4 L;C標準:標準溶液濃度,100μmol/L; W:樣本質量。
1、當ΔA 大于 1 時,建議將上清液稀釋后進行測定;當ΔA 小于 0.02 時,建議延長反應時間。計算公式中注意乘以稀釋倍數或注意反應時間變化。