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土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）活性檢測試劑盒說明書 微量法
貨號：4033
規格：100T/48S
產品內容：
試劑一：液體30mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入2mL丙酮溶解，用不完的試劑仍-20℃保存； 試劑三：液體30mL×1 瓶，4℃保存；
標準品：液體1mL×1支，5 mmol/L的對硝基苯酚溶液，4℃保存。臨用前用試劑一將標準品稀釋50倍得100μmol/L 的標準溶液。
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）是土壤微生物分泌的溶酶體中的一種酸性水解酶。其活性變化與機體某些病理狀態密切相關。
S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算NAG活性。
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰、30-50目篩（或更小）和蒸餾水。
一、樣本處理：
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30-50目篩。二、測定步驟：
（1） 分光光度計/酶標儀預熱30min，波長調至400nm，蒸餾水調零。
（2） 加樣表：
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 |
風干土樣（g） | 0.03 | 0.03 | - | - |
試劑一（μL） | 165 | 165 | - | - |
試劑二（μL） | 15 | - | - | - |
混勻，37℃水浴1h 后，立即沸水浴5min（蓋緊， 防止水分散失），流水/冰浴冷卻。 | - | - | ||
試劑二（μL） | - | 15 | - | - |
12000g 25℃離心10min，取上清液 | - | - | ||
上清液（μL） | 100 | 100 | - | - |
標準品（μL） | - | - | 100 | - |
蒸餾水（μL） | - | - | 100 | |
試劑三（μL） | 200 | 200 | 200 | 200 |
室溫靜置2min 后，10000g 常溫離心5min，吸取200μL上清于微量玻璃比色皿或直接在96孔板中，測定400nm處的吸光值A。分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管。計算ΔA=A 測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A 空白管。每個測定管設一個對照管。 | ||||
單位的定義：每天每g土樣中產生1 μmol 對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
S-NAG活力（U/g 土樣）＝ΔA÷ (ΔA標準÷C標準)×V 反總÷W÷T =0.432× ΔA÷ ΔA標準÷W。
T：反應時間，1h=1/24d；V 反總：反應體系總體積：1.8×10-4 L；C標準：標準溶液濃度，100μmol/L； W：樣本質量。
1、當ΔA 大于 1 時，建議將上清液稀釋后進行測定；當ΔA 小于 0.02 時，建議延長反應時間。計算公式中注意乘以稀釋倍數或注意反應時間變化。
