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NO含量測試盒(微量法)

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產品價格: 面議/人民幣 
最后更新: 2025-05-12 13:54:53
產品產地: 本地
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  • 公司基本資料信息
    • 河南歐諾生物科技有限公司
    • 邱曉亮先生 總經理
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    產品詳細說明
    • 產品貨號:5106
      檢測范圍:
    • 產品規格:100T/96樣
      保存溫度:2-8°
    • 目錄價:¥390

    一氧化氮(Nitric oxide,NO)含量測定試劑盒說明書

    微量法

    注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

    測定意義:

    NONitric Oxide,NO)廣泛分布于生物體內神經、循環、呼吸、消化、泌尿生殖等系統中,特別是神經組織中較豐富。它作為細胞間及細胞內的信息物質,發揮信號傳遞的作用,是一種新型的生物信使分子,在機體的生理、病理過程中起著重要的作用。

    測定原理:

    NO在體內或水溶液中極易氧化生成 NO2-,在酸性條件下,NO2-與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物,進一步與萘基乙烯基二胺偶合,產物在550nm處有特征吸收峰,測定其吸光值,可以計算NO含量。為了排除樣品色素等的影響,每個樣品需做對照管。

    自備實驗用品及儀器:

    天平、研缽或勻漿器、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水。

    試劑組成和配制:

    提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。

    試劑一:液體 3mL×1 瓶,4℃避光保存。

    試劑二:液體 3mL×1 瓶,4℃保存。

    試劑三:液體 6mL×1 瓶,4℃避光保存。

    樣品處理:

    1. 組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿。10000g,4℃離心 15min,取上清,置冰上待測。

    2. 細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心 15min,取上清置于冰上待測。

    3. 體液和培養液等其它液態樣品:直接測定。

    測定步驟和操作表:

    1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至550nm。

    2、 操作表


    對照管

    測定管

    樣品(μL

    100

    100

    試劑一(μL


    50

    試劑二(μL

    50


    試劑三(μL

    50

    50

    混勻,室溫靜置 15min,于微量石英比色皿/96 孔板,對照管調零,測定 550nm 處吸光

    值,記為 A 550

    NO 含量計算:

    a.  用微量石英比色皿測定的計算公式如下

    標準曲線回歸方程為:y=0.016x-0.0103,R2=0. 9986

    1、組織樣品:

    NO含量定義:25℃時,每克樣品或每毫克蛋白15min生成1μmoL NO2-,相當于1μmoL NO。

    1)按樣本質量計算

    NO 含量(μmoL/g=A 550 +0.0103÷0.016×V 反總÷V ÷V 樣總×W×10 -3

    = 0.125×A 550 +0.0103÷W

    2)按樣本蛋白濃度計算

    NO 含量(μmoL/mg prot=A 550 +0.0103÷0.016×V 反總÷V ×Cpr×10 -3

    = 0.125×A 550 +0.0103÷Cpr

    2、其他樣品:

    NO 含量定義:25℃時,每升樣品15min生成 1μmoL NO2-,相當于1μmoL NO。

    NO 含量(μmoL/L=A 550+0.0103÷0.016×V 反總÷V

    = 125×A 550+0.0103

    V 反總:反應總體積,0.2mLV 樣:反應中樣品體積,0.1mLV 樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣品質量,gCpr:蛋白濃度,mg/mL

    b. 96 孔板測定的計算公式如下

    標準曲線回歸方程為:y= 0.008x-0.0103R2=0. 9986

    1、組織樣品:

    NO含量定義:25℃時,每克樣品或每毫克蛋白15min生成 1μmoL NO2-,相當于1μmoL NO。

    1)按樣本重量計算

    NO 含量(μmoL/g=A 550 +0.0103÷0.008×V 反總÷V ÷V 樣總×W×10 -3

    = 0.25×A 550+0.0103÷W

    2)按樣本蛋白濃度計算

    NO 含量(μmoL/mg prot=A 550+0.0103÷0.008×V 反總÷V ×Cpr×10 -3

    = 0.25×A 550+0.0103÷ Cpr

    2、細胞

    NO 含量定義:25℃時,每104個細胞15min 生成 1μmoL NO2-,相當于1μmoL NO

    NO 含量(μmol/104cell=A 550+0.0103÷0.008×V反總÷V÷V樣總×細胞數量)×10 -3= 0.25×A 550+0.0103÷細胞數量(萬個)

    3、 其他樣品:

    NO 含量定義:25℃時,每升樣品 15min 生成 1μmoL NO2-,相當于1μmoL NO。

    NO 含量(μmoL/L=A 550 +0.0103÷0.008× V 反總÷V = 250×A 550 +0.0103

    V 反總:反應總體積,0.2mL;V 樣:反應中樣品體積,0.1mLV 樣總:加入提取液體積,

    1mL;W:樣品質量,g;Cpr:蛋白濃度,mg/mL



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