細胞馴化

  1）直接馴化

  大部分情況下，培養于其他培養基中的細胞，可以直接適應Balance CD 293 medium，只要按照日常傳代方式（稀釋）更換培養基即可。

  2）漸進式馴化

  注意：選用低代次、處于對數生長期的細胞進行馴化

  ①在原培養基中復蘇細胞并繼續使用該培養基傳代2到3次至細胞生長穩定，當細胞密度達到2x10 6 cells/ml后進行傳代，傳代細胞密度控制在0.5-0.6×10 6 cells/mL，5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293培養基的比例為75:25；

  ②將細胞置于37℃，5% CO2，轉速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養；

  ③當細胞密度3-4天后達到3x10 6 cells/ml且細胞活率>90%，傳代時5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293培養基的比例為50:50，細胞密度控制在0.5×10 6 cells/mL。如細胞生長慢，可離心上清，留20%條件培養基，加入80%的5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293 培養基比例為75:25的混合培養基，繼續培養；

  ④重復步驟③逐步增加Balance CD 293培養基所占的比例(5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與Balance CD 293 培養基的比例為25:75至10:90）直到100%的Balance CD 293培養基；

  ⑤經過在100%的 Balance CD 293 培養基中的幾次傳代培養，傳代后3-4天細胞的密度可以達到2-3×10 6  cells/mL，細胞活率大于90%，這說明細胞已經完全適應了Balance CD 293 培養基。之后進行細胞的傳代培養時，細胞的起始密度可以降到0.3×10 6 cells/mL，一般傳代2-3次后再進行轉染實驗。

  注意: 一般細胞馴化過程中，前三代細胞的狀態可能不是很好，但一般從第四代狀態會有改善。

  293無血清培養基

  http://www.shclbio.com/list/1996811.html

  https://www.chem17.com/st426375/erlist_1996811.html