沈陽二級醫(yī)院核酸檢測實驗室建設(shè)設(shè)計方案

《關(guān)于進一步做好疫情期間新冠病毒檢測有關(guān)工作的通知》，所有縣區(qū)級以上疾控機構(gòu)、二級以上綜合醫(yī)院要抓緊進行改造，在短時間內(nèi)形成核酸檢測能力，這意味著核酸檢測機構(gòu)將擴大到縣、市、區(qū)。國家政策的倡導(dǎo)，讓全國各地不論大小的縣、市、區(qū)的醫(yī)院與疾控中心短時間內(nèi)就要建設(shè)好新冠核酸檢測PCR實驗室，新冠核酸檢測PCR實驗室設(shè)計依據(jù)與建設(shè)流程，PCR實驗室設(shè)計布局。
一、臨床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設(shè)置原則
(一) 臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個分隔開的工作區(qū)域：
1、試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)
2、標(biāo)本制備區(qū)
3、擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)
4、擴增產(chǎn)物分析區(qū)
如使用全自動分析儀,區(qū)域可適當(dāng)合并。
(二）各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。
(三)進入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進行,即試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)。
(四)不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開各工作區(qū)域時,不得將工作服帶出。
二、工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)
(一)試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)
1、2～8℃和-15℃冰箱
2、混勻器
3、微量加樣器(覆蓋l～1000ul)
4、移動紫外燈(近工作臺面)
5、消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心)
6、專用工作服和工作鞋
7、專用辦公用品(二)標(biāo)本制備區(qū)
1、2～8℃冰箱、-20℃或-80℃冰箱
2、高速臺式冷凍離心機
3、混勻器
4、水浴箱或加熱模塊
5、微量加樣器(覆蓋1～1000ul)
6、可移動紫外燈(近工作臺面)
7、超凈工作臺
8、消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心)
9、專用工作服和工作鞋
10、專用辦公用品 如需處理大分子DNA,應(yīng)備有超聲波水浴儀。（三）擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)
1、 核酸擴增儀
2、 微量加樣器(覆蓋1～1000ul)
3、 可移動紫外燈(近工作臺面)
4、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心) 5、專用工作服和工作鞋
6、專用辦公用品

PCR實驗室建設(shè)四要素
1 試劑準(zhǔn)備區(qū)
用于試驗試劑的準(zhǔn)備。該區(qū)域為正壓，目的是防止污染物質(zhì)溢入。該區(qū)域內(nèi)部又可分為3個區(qū)域：普通提取試劑的準(zhǔn)備區(qū)、PCR試劑準(zhǔn)備區(qū)和PCR主反應(yīng)液準(zhǔn)備區(qū)。在普通提取試劑的準(zhǔn)備區(qū)內(nèi)準(zhǔn)備一些樣品核酸提取時所需的裂解液、提取液等；PCR試劑準(zhǔn)備區(qū)用于PCR試劑的制備和保存。例如準(zhǔn)備引物、探針等PCR試劑。為了防止交叉污染，避免反復(fù)冷凍和解凍，試劑存貯溶液應(yīng)該被平均為小的工作體積，儲存在這個房間以備后用：PCR主反應(yīng)液準(zhǔn)備區(qū)將進行主反應(yīng)混合液(除了樣品。所有PCR所需試劑的混合)添加到PCR管的操作。重要提示：不能將其它房間的材料(包括擴增、模板和目標(biāo)核酸或陽性對照、供應(yīng)品、或設(shè)備)帶進試劑準(zhǔn)備區(qū)。
2 樣品準(zhǔn)備區(qū)
該區(qū)域無壓力設(shè)置要求。該區(qū)域是用于對樣品進行分樣，將樣品進行研磨、粉碎、勻漿的區(qū)域。由于在這些粉碎、研磨和勻漿處理過程中會產(chǎn)生氣溶膠，因此，存在陽性樣品污染后續(xù)操作的可能性。該區(qū)域與后面的區(qū)域應(yīng)嚴(yán)格隔離，應(yīng)放在與后面的三個區(qū)域隔開的獨立的房間中。在樣品準(zhǔn)備區(qū)內(nèi)還可設(shè)立一個專用的封閉區(qū)或房間用于樣品的接收和儲存。這個房間可以放置冰箱用于樣品儲存，應(yīng)該和樣品準(zhǔn)備區(qū)其它區(qū)域隔離開。樣品準(zhǔn)備區(qū)域的人員不得進入試劑準(zhǔn)備區(qū)。
3 核酸提取區(qū)
核酸提取區(qū)是進行樣品核酸提取的區(qū)域。該區(qū)域為負壓，目的是防止核酸溢出造成污染。樣品準(zhǔn)備區(qū)又包括從樣品中進行核酸提取和純化的區(qū)域以及將核酸加到包含PCR主反應(yīng)混合液管中的操作區(qū)域。添加完樣品后，PCR管的蓋子要盡可能快地蓋好。使用PCR板和膠蓋時，陽性對照和含目標(biāo)序列的樣品要與待測樣本分開操作，以避免模板添加時造成交叉污染
重要提示：這個房間里的一切物品不得帶人試劑準(zhǔn)備區(qū)。
4 擴增和產(chǎn)品檢測區(qū)
該區(qū)域是用來進行PCR擴增和PCR分析的。PER儀放置在這個區(qū)域。房間保持負壓，目的是防止核酸溢出。在該區(qū)域人員一定要一直穿戴工作服和手套，在離開房間前脫去，防止擴增子污染其它地點。所有用于擴增和產(chǎn)品檢測的設(shè)備要指定用于這個房間。PCR分析]二作也設(shè)置在該區(qū)域，例如：酶切、測序、克隆等，但實驗室應(yīng)盡可能把這些活動分隔在不同區(qū)域或不同房間。以降低擴增產(chǎn)物的污染風(fēng)險。如果沒有條件在該區(qū)域設(shè)立負壓，此區(qū)域必須建立排風(fēng)裝置。