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河北靈芝盆景廠家 優質野生靈芝批發采購
全稱:山東冠縣旭卓靈芝專業合作社
聯系人:郭金強
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冠縣靈芝講靈芝母種的制作
冠縣靈芝母種是采用孢子或組織分離培養獲得和保存的靈芝純菌絲體,并經栽培試驗鑒定,具有優良經濟性狀且相對穩定的試管種。
一般芝農可以從科研單位或者菌種保藏機構引進靈芝母種,技術力量較強的生產單位,也可通過組織分離制備靈芝母種。
(一)培養基配制
(1)培養基配方
1、PDA培養基
馬鈴薯(去皮)200克,葡萄糖20克,瓊脂20克,水1000毫升。
2、綜合馬鈴薯培養基
馬鈴薯(去皮)200克,葡萄糖20克,磷酸二氫鉀2克,硫酸鎂0.5克,瓊脂20克,水1000毫升。
3、馬鈴薯麥麩綜合培養基
馬鈴薯(去皮)200克,麥麩100克,葡萄糖20克,磷酸二氫鉀2克,硫酸鎂0.5克,瓊脂20克,水1000毫升。
4、馬鈴薯酵母粉綜合培養基
馬鈴薯200克,葡萄糖20克,酵母粉4克,磷酸二氫鉀2克,硫酸鎂0.5克,瓊脂20克,水1000毫升。
(2)培養基的制作步驟
材料選擇—>準確稱量—>萃取—>配制定量—>分裝—>調PH—>滅菌(121°C、30分鐘)—>斜面擺放(培養基長度為試管長度的2/3)。
(3)PDA培養基制備方法
稱取去皮、切片的馬鈴薯200克,置于鍋內,加入水1000毫升,煮至薯片軟而不爛。用4-6層紗布過濾,取濾液。向濾液中加入瓊脂20克,繼續煮沸至瓊脂完全融化,加入葡萄糖20克,補水至1000毫升。趁熱分裝于試管中,裝至試管長度的1/5-1/4,擦凈管口,塞上棉塞或者硅橡膠塞。棉塞力求大小規范,松緊適中,不能出現縫隙。然后,在0.11兆帕、121°C條件下滅菌30分鐘。
滅菌后、斜放試管,擺放斜面,使培養基前端蔓延至試管長度1/2,蓋上紗布或滅菌的報紙(防冷凝水過多),待培養基凝固(靜置24小時)后,取3-5支試管置于30°C培養3天,若無雜菌出現,表明滅菌徹底,可供接種用。
(二)菌種分離與培養
(1)種芝選擇
生產中,一般選用無病蟲害的6-7分成熟的鮮芝做種芝。種芝表面可經紫外照射消毒、酒精擦拭消毒。
(2)組織分離
組織分離之前,先用酒精棉球擦拭種芝的表面,再將菌蓋撕開,一分為二。一般選擇靈芝菌蓋黃白色生長區菌肉組織或者靈芝菌柄上方菌蓋中部的菌肉組織為取種部位。組織分離時,可先用無菌手術刀小心切割靈芝菌肉,然后用接種針取5毫米x5毫米的小塊菌肉組織,接入試管培養基中上部表面。
(3)培養
將上述分離物置于生化培養箱中培養。
調溫至28-30°C,避光培養。經過2-3天,菌肉組織既可開始萌發,出現肉眼可見的菌絲體,并在培養基表面逐漸蔓延。一般7-10天可長滿試管斜面。如果分離物(菌肉組織)不到2天就出現肉眼可見的菌絲體,多事雜菌。如果分離物(菌肉組織)培養4天仍為出現肉眼可見的菌絲體,可能是切割靈芝菌肉組織的手術刀或接種針在酒精火焰上方灼燒之后沒有充分冷卻,或者其它原因導致分離物(菌肉組織)失去活性而不能萌發菌絲體。
靈芝菌絲體潔白、纖細、平坦、致密、均勻,隨著菌絲的生長、菌落的擴展,接種塊處的菌絲逐漸老化形成堅韌的菌皮,并隨著菌皮的老化,色澤逐漸變為淡黃色。
(4)質量要求
挑選靈芝菌絲體生長整齊,長速正常,菌絲外觀飽滿,長勢旺盛,氣生菌絲潔白、纖細、平坦、致密、均勻的分離物作為備用菌種。
(三)母種生產過程中的注意事項
(1)指定適宜的菌種生產計劃,母種在試管長滿后可在冰箱中保藏一段時間,但原種和栽培種長滿瓶(袋)后要求盡快用于生產。
(2)無論是組織分離獲得的菌種還是購買的菌種,都要進行栽培試驗,符合生產要求的菌種可用于規模化生產。菌種選擇有誤,將會對生產造成不可估量的損失。
(3)進行菌種的組織分離和轉管,必須嚴格遵循無菌操作的有關要求。
(4)盡量避免多次轉管。在轉管過程中可能出現基因突變,使菌種退化,降低菌種的生活里。通常,靈芝母種經過3-4次轉管后,就需要重新進行分離復壯,重新進行栽培試驗,汰劣存優。