僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。

孔雀石綠(MG)檢測試劑盒（ELISA）

說明書

貨號：INS9000002

    使用前，請務必仔細閱讀說明書，如有不清楚的，請撥打24h技術支持專線：0714-6338558或18171667592/18108699172，咨詢清楚再進行實驗。

黃石市艾恩斯生物科技有限公司

網(wǎng)址：www.inselisa.com

電話：0714-6338558

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：孔雀石綠檢測試劑盒（ELISA）

英文名稱：Test Kit for  MalachiteGreen oxalate（ELISA）

【包裝規(guī)格】

48T/盒，96T/盒

【預期用途】

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測各種不同類型樣本中的孔雀石綠（ MalachiteGreen oxalate ，MG）。

【檢驗原理】

  本試劑盒系由預包被偶聯(lián)抗原的酶標板（固相抗原，貨號：INS9000002C）、辣根酶標記物（辣根酶標記物，貨號：INS9000002E）、抗體（貨號：INS9000002J）、標準品及其他配套試劑組成,應用競爭酶聯(lián)免疫法原理檢測樣本中孔雀石綠。實驗時在酶標板中加待檢樣本和標準品，若樣品中含有孔雀石綠則將與酶標板上偶聯(lián)抗原競爭孔雀石綠抗體，從而使后續(xù)反應不出現(xiàn)顯色；反之則出現(xiàn)顯色；顯色深淺與樣品中的特異性孔雀石綠含量成負相關；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，與標準曲線比較即可得出樣本中孔雀石綠的殘留量。

【主要組成成分】

主要成分

備注：

1、高濃度標準品溶液1瓶（高標準液有揮發(fā)性，需注意密封）：10ppb濃度的標準品

2、標準品濃度依次為：0ppb、0.025ppb、0.05ppb、0.1ppb、0.2ppb、0.4ppb

3、 經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶標儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、離心機

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、相關的樣品配液

7、天平（感量0.01g）

【儲存條件及有效期】

  1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。

  2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。

  3、開封后，按照建議的條件保存，校準品、包被微孔板和HRP標記抗體，有效期為28天，其他成分在標簽標明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

【適用儀器】

  半自動的酶標儀，如Thermo MK3，或者國產(chǎn)酶標儀。

【樣本要求】

    樣本類型和處理

本產(chǎn)品涉及的樣本類型較多，在進行樣本處理前要配制相關液體，且不同樣本處理方法不一，因此不同樣本稀釋倍數(shù)不同檢測下限不同（樣本前處理和樣本處理方法聯(lián)系相關工作人員索取）。

樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【檢驗方法】

試劑準備

1、使用前，所有的組分都要至少復溫2h，確保充分復溫到室溫。

2、若標準品應用液未配制好的，則實驗開始前需配制標準品應用液；低濃度的標準品不穩(wěn)定，需現(xiàn)配現(xiàn)用（配制方法請聯(lián)系相關工作人員）。

3、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結(jié)晶產(chǎn)生，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。

4、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1體積充分混合，混合后15分鐘內(nèi)使用。

操作程序

1、將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡兩小時以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

2、按前面試劑準備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。

3、將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個標準品孔、樣本孔做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

4、加標準品應用液或樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加抗體工作液50μl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。

6、所有孔加入辣根過氧化物酶標記物100μL。

7、用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

8、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。

9、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。

   10、每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光度值。測定應在終止反應后10分鐘內(nèi)完成。

【檢驗結(jié)果的解釋】

1.百分吸光率的計算

    標準液或樣本的百分吸光率等于標準液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標準液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即

A—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標準溶液的平均吸光度值

2.標準曲線的繪制與計算

    以標準液百分吸光率為縱坐標，對應的標準液濃度（ppb）的對數(shù)為橫坐標，繪制標準液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度。

【檢驗方法的局限性】

1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。

2、在試劑盒標示的有效期內(nèi)使用，過期產(chǎn)品不得使用。

3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。

4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。

5、如果樣本值高于最高標準品濃度值，請將樣本適當稀釋后，再重新測定。

6、通過其他方法得到的檢測結(jié)果，與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性。

【產(chǎn)品性能指標】

1、物理性能

試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣。

2、精密度

批內(nèi)精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在同一個板塊內(nèi)精度評估。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于15%。

批間精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。批間變異系數(shù)CV%小于20%。

3、靈敏度

最低檢出劑量小于0.025ppb。

4、回收率

三組已知的高、中、低濃度樣品，進行十次回收率評估，回收率在85%±15%之間。

5、特異性

本試劑盒識別天然和重組孔雀石綠(MG)，與個別結(jié)構(gòu)類似物有25%以內(nèi)的交叉率。

7、穩(wěn)定性

    2℃-8℃保存，有效期6個月。

【注意事項】

生物安全

1、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。

2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應，避免吸入煙霧與皮膚接觸。

3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護手套，實驗完成后徹底洗手。

技術提示

1、混合蛋白溶液時，避免起泡。

2、加標準品與樣本時，每個標準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應該懸臂加樣，避免交叉污染。

3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結(jié)果準確性的必要條件。

4、底物溶液為無色液體，保存過程中變?yōu)樗{色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產(chǎn)物，會瞬間變?yōu)辄S色。

6、實驗中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。

廢物處理

  所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應當遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序，每個實驗室都有責任根據(jù)其實驗的類型和危險性級別，進行廢物和污物的處理，同時要嚴格依照有關規(guī)定對待所有的廢物和污物。

【基本信息】

  企業(yè)名稱：黃石市艾恩斯生物科技有限公司

  生產(chǎn)地址：湖北省黃石市黃石港區(qū)磁湖路41號

  固定電話：0714-6338558

  網(wǎng)    址：www.inselisa.com

  郵    箱：postmaster@inselisa.com

【說明書批準日期及修改日期】

  批準日期：2013.05.12

  第一次修改日期：2016.02.16