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羅氏潮霉素B作用機制:
潮霉素B是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死細菌、真菌和高等真核細胞。潮霉素B通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成。目前常用于篩選和維持培養(yǎng)含潮霉素抗性基因的原核或真核細胞。
抗性基因:
對潮霉素B的抗性源自編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶(Hph)的基因。至今發(fā)現(xiàn)兩種來源:
Streptomyces hygroscopicus產(chǎn)生的Hph抗性基因;
Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae內(nèi)質(zhì)粒攜帶的Hph抗性基因(常用);
羅氏潮霉素B生物應(yīng)用:
1) 篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph 載體的原核細胞或真核細胞(植物細胞和哺乳動物細胞);
2)由于作用模式的差異,常與G418 (GeneticinTM),Zeocin™和blasticidin S聯(lián)合使用,篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩個不同載體的細胞株;
3)抗病毒劑,由于潮霉素B選擇性滲透進入因病毒感染增強通透性的細胞,而且具有抑制翻譯的功效;
4)作為驅(qū)蟲藥加入動物飼料;
羅氏潮霉素B應(yīng)用濃度:
潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化。推薦使用濃度為50-1000 μg/mL,最佳濃度需要殺滅曲線來確定。
哺乳動物細胞·200-500 μg/mL;細菌/植物細胞·100-300 μg/mL;真菌·300-1000μg/mL;
羅氏潮霉素B資料出處http://www.chem17.com/st251749
http://www.wissen-bio.com/wbscell-SonList-1098137/